Editando Fibrosis quística (sección)

=== Diagnóstico molecular ===
El [[Diagnóstico Molecular]] de la enfermedad es complejo, ya que en noviembre de 2010 nos encontramos con 1824 mutaciones descritas<ref name="sickkids1"/> y la mayoría son puntuales o pequeñas deleciones. Estas mutaciones se agrupan en función del efecto que tienen sobre el gen y sobre el fenotipo de la enfermedad. Además de la variabilidad de las mutaciones en sí mismas, las distintas poblaciones tienen frecuencias diferentes para las mismas, por lo que los estudios y test diagnósticos deben gestionarse considerando este aspecto. No obstante, la más común en la mayoría de las poblaciones es la deleción 508F.

Hay que tener en cuenta que la distribución de alelos varía mucho en cada población, por lo que hay que adaptar los tests para detectar aquellas variantes más comunes en la población que se esté estudiando.

Actualmente a los niños nada más nacer se les hace un diagnóstico genético mediante secuenciación del gen CFTR para saber si tienen la enfermedad, ya que es una enfermedad tratable. Cuando antes comienza el tratamiento, mayor calidad de vida y mayor longevidad.
* '''Diagnóstico molecular indirecto''': básicamente realizado a través de análisis de [[ligamiento]]. Se lleva a cabo mediante:
* [[RFLP]]: método antiguo basado en [[Enzima de restricción|restricción]] actualmente en desuso.
* Marcadores [[microsatélite]]s: es el método seguido actualmente. Los estudios solo son válidos dentro del mismo árbol familiar.
* Marcadores [[Polimorfismo de nucleótido simple|SNP]]: serán los usados en un futuro próximo, pues tienen la ventaja de que los resultados obtenidos son aplicables entre personas no emparentadas.
* '''Diagnóstico molecular directo''': podríamos secuenciar el gen [[CFTR]], pero lo que está a la orden del día es la detección de las mutaciones, que básicamente se realiza a partir de dos estrategias:
** Rastreo de mutaciones: técnicas de detección de mutaciones, pero sin identificación de la mutación. Algunas de las más usadas en este proceso son la [[electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización]], así como algunas variantes de [[Reacción en cadena de la polimerasa|PCR]]. Un ejemplo de esto es la detección de la mutación ΔF508. Esta detección se realiza gracias a una enzima de restricción que corta al alelo sano que no presenta la detección mencionada, lo que permite que el producto de PCR tras la amplificación sea menor en el alelo sano que en el que presenta la mutación, viéndose así la diferencia.
** Identificación de mutaciones: técnicas basadas en hibridación específica con el alelo mutado. Por ejemplo, los kits ASO:dot blot, OLA ([[ensayo de ligación de oligonucleótidos]]), o el ensayo más tradicional de [[southern blot]].
*** '''ASO: dot blot''': es utilizado para la detección de mutaciones definidas conocidas previamente. Readquiere la amplificación del ADN a estudiar. Posteriormente se fija a una membrana (sin tratamiento ni electroforesis previos). Entonces se hibrida con [[oligonucleótido]]s específicos del alelo de unos 20 pares de bases que se encuentran marcados para su posterior detección. Se trata de una técnica sencilla, barata, rápida y segura si se estudia (como en el caso de la fibrosis quística) un único gen con pocas mutaciones. Aunque resulta caro si hay que rehibridar muchas veces. Para esos casos tenemos '''ASO: dot blot inverso''', en el que la membrana tiene fijada los distintos alelos y estos son hibridados con el producto amplificado genómico marcado.
*** '''[[Ensayo de ligación de oligonucleótidos|OLA]]''': es el método más usado actualmente en el estudio de fibrosis quística, pero cuando llegue la secuenciación predeciblemente quedará desplazado por esta. Son necesarios dos pasos: un primer paso consiste en una [[PCR multiplex]] de los fragmentos génicos a estudiar. Posteriormente dos ciclos de ligamiento con ligasa termoestable y oligonucleótidos específicos de los alelos. Estos primeros pasos se realizan todos en el mismo tubo de reacción. Se realiza entonces un estudio de los fragmentos por [[electroforesis capilar]]. Las ventajas de este proceso es su automatización, aunque es costoso debido a la necesidad de un secuenciador automático.